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Expresión génica de transportadores de zinc en el complejo ovocito-cúmulus bovino: influencia de tres hormonas reproductivas

El trabajo fue presentado en el 3° Congreso Internacional de la Sociedad Argentina de Tecnologías Embrionarias."Acercando las tecnologías embrionarias entre el laboratorio y el campo". 2 y 3 de Junio de 2016. Buenos Aires, Argentina

Autores: Pascua AM(1); Quintana S(2); Nikoloff N(1); Sirini MA1; Anchordoquy JP(1); Anchordoquy JM(1); Furnus CC(1)

(1) IGEVET, Instituto de Genética Veterinaria “Ing. Fernando N Dulout” (UNLP-CONICET-CONICET LA PLATA), Facultad de Ciencias Veterinarias - UNLP, Calle 60 118, B1904AMA La Plata, Buenos Aires, Argentina.

(2) Instituto de Análisis Fares Taie, Rivadavia 3331, 7600. Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina

El zinc (Zn) interviene en una amplia variedad de procesos celulares y su disponibilidad tiene influencia sobre distintos procesos reproductivos y en el desarrollo embrionario. Sin embargo, los mecanismos que regulan la homeostasis del Zn en el complejo ovocito-cúmulus (COC) y otras células del aparato reproductor, han sido poco estudiados. Para evaluar la entrada y salida de Zn a la célula es indispensable analizar la expresión de los transportadores de este micronutriente. En este sentido, se evaluó la expresión de ARNm de cuatro transportadores de Zn (ZIP 6 y Znt 3, 7 y 9) en ovocitos y células del cúmulus de bovino bajo la influencia de tres hormonas reproductivas: estradiol (E2), hormona folículo estimulante (FSH) y luteinizante (LH). Para ello, los COCs se maduraron in vitro durante 24 hs con los siguientes tratamientos: (1a) suplementación hormonal (E2 1µg/ml, FSH 1 µg/ml, LH 10 µg/ml) más el agregado de 120 µg/dl Zn (concentración normal) y (1b) suplementación sólo hormonal.

Se realizaron controles de maduración sin hormonas: (2a) bajo suplementación con Zn, (2b) sin suplementación con Zn. Luego, se extrajo ARN, se lo digirió con DNAsa y se estudió mediante RT-PCR la presencia o ausencia de ARNm en ovocitos y células del cúmulus. Los resultados obtenidos muestran por primera vez la expresión del ARNm de los transportadores ZIP 6 y Znt9 en el ovocito bovino, mientras que en las células del cúmulus se expresan Znt 9 y Znt 3. No se detectó ARNm correspondiente a Znt 7 en ninguno de los de los tipos celulares mencionados. Los resultados de expresión correspondiente a cada tratamiento se muestran a continuación:

 


Tipo celular

T=0 de maduración

Suplementación hormonal

Sin suplementación hormonal

Con Zn

Sin Zn

Con Zn

Sin Zn

Zip6

Ovocitos

+

-

+

+

+

Cúmulus

-

-

-

-

-

Znt3

Ovocitos

-

-

-

-

-

Cúmulus

-

+

-

+

-

Znt7

Ovocitos

-

-

-

-

-

Cúmulus

-

-

-

-

-

Znt9

Ovocitos

-

-

-

+

+

Cúmulus

-

+

-

-

-

 

En conclusión, en cuanto a los ovocitos, no se registró expresión de ZIP 6 luego de la maduración con zinc bajo la acción de las hormonas estudiadas, y tampoco la de Znt 9 con suplementación hormonal, en presencia o ausencia de zinc. Por otra parte, en el cúmulus, Znt 9 no se expresó en ningún caso bajo acción hormonal, así como Znt 3 en ninguna situación de ausencia zinc.

Vale destacar la expresión positiva de ZIP 6 ya en el ovocito inmaduro. Aunque estos estudios deben ser llevados a mayor profundidad mediante un análisis de expresión con discriminación de cada hormona agregada, estas diferencias sugieren que las hormonas reproductivas incidirían en la expresión génica de los transportadores estudiados.

 

expresion genica

 

 

 

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