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High Resolution Melting (HRM) como método de screening de mutaciones en los Exones 10 y 11 del proto-oncogén RET

Trabajo presentado en el XLIV Congreso Argentino de Genética llevado a cabo en la ciudad de Mar del Plata del 13 al 16 de Septiembre de 2015.
Trabajo seleccionado para presentación oral.

Autores:

Labarthe MM (1) , V Di Gerónimo (1) , G Sansó (2) , S Quintana (1).

(1) Laboratorio de Biología Molecular, Fares Taie Instituto de Análisis. Mar del Plata, Argentina.

(2) Centro de Investigaciones Endocrinológicas "Dr. César Bergadá". CEDIE- CONICET – FEI – División de Endocrinología, Hospital de Niños "Ricardo Gutiérrez".

Trabajo seleccionado para presentación oral.

Resumen

En más del 95 % de pacientes con neoplasia endócrina múltiple tipo 2 (MEN-2) se han identificado mutaciones activadoras del proto-oncogén RET.

La detección de estas mutaciones en familias con MEN-2 permite el diagnóstico y tratamiento precoz de los familiares del caso índice con alto riesgo de desarrollar a enfermedad.

Es el objetivo de este trabajo determinar la utilidad de la técnica de HRM como método de screening de mutaciones en los exones 10 y 11 del roto-oncogén RET.

En los ensayos se utilizaron muestras de pacientes estudiadas previamente por secuenciación.

Para la detección de mutaciones en el xón 10 se procesaron 30 muestras de ADN las cuales presentaban las mutaciones Cys620Ser, Cys609Arg, Cys618Phe, Cys620Arg, Cys611Phe, Cys620Ser, Cys609Arg y controles (normales) wild type. Para el estudio del exón 11 se procesaron 27 muestras de ADN que presentaban las mutaciones Cys634Tyr, Cys634Gly, Cys634Phe, Cys634Arg y controles wild type. Las amplificaciones por PCR en tiempo real y el análisis por HRM se llevaron a cabo en un Termociclador Rotor Gene Q con Evagreen como intercalante fluorescente.

Las técnicas desarrolladas mostraron una concordancia total con la técnica de secuenciación automática mostrando una sensibilidad del 100 % para la detección de las mutaciones en los exones 10 y 11 del proto-oncogén RET ensayados en este trabajo. En conclusión, la técnica de HRM presenta varias ventajas como método de screening de la presencia de mutaciones en los exones 10 y 11 del proto-oncogén RET debido a su alta sensibilidad y rapidez (<1,5 horas). 

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