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Estudio de prevalencia de genotipos del virus papiloma humano (HPV) en Mar del Plata, incorporando como método de screening el análisis por High Resolution Meting

Trabajo presentado en la XXXIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología, 2 y 3 de Diciembre de 2013

Autores:

Quintana, S.(1); Colace, G. (1); Guerra, FR.(2); Di Gerónimo, V.(1); Estevez, MS. (1), Palaoro, L.(2)

(1) Área Biología Molecular, Fares Taie Instituto de Análisis, Mar del Plata, Argentina.

Contacto: biologiamolecular@farestaie.com.ar

(2) Laboratorio de Citología, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires.

 

La relación entre la infección por el virus papiloma humano (HPV) de alto riesgo y el cáncer de cuello de útero ha sido bien demostrada. En la Argentina se observa una alta incidencia de esta patología y en consecuencia se estima una alta prevalencia de infección por HPV. La técnica de High Resolution Melting (HRM) es un nuevo método de análisis que permite caracterizar productos de PCR en base a la longitud de la secuencia, el contenido de GC y la complementariedad de secuencia de ADN. El análisis por HRM se puede utilizar para determinar genotipos y especies de diferentes virus y bacterias.

El objetivo del presente trabajo fue identificar los genotipos de HPV asociados a casos de lesiones de cuello de útero utilizando las metodologías tradicionales de identificación de genotipos e incorporando la técnica de HRM. Se estudiaron 99 muestras ecto-endo cervicales de mujeres con alteraciones cito-histológicas compatibles con infección por HPV. La puesta a punto de la metodología se realizó analizando controles de los genotipos 6, 11,16 y 18 de HPV mediante amplificación por PCR en tiempo Real genérica y posterior análisis por HRM, presentando los diferentes genotipos patrones de HRM característicos. La genotipificación fue realizada por amplificación por PCR en tiempo Real del ADN extraído de las muestras con los primers genéricos My9-11 y/o GP5-GP6 con posterior análisis por HRM y secuenciación. Aquellas muestras con patrones de melting característicos de los genotipos 6, 11,16 y 18 fueron estudiadas por reacciones de PCR genotipo específicas. Aquellas cuyos patrones de HRM se correspondieron con los genotipos 6, 11, 18 y 16, fueron confirmadas por secuenciación.

De las 99 pacientes estudiadas 95 resultaron positivas para HPV, detectándose 19 genotipos diferentes. Un 38,9% de las muestras resultaron genotipos de bajo riesgo, un 33,6 % de alto riesgo y un 8,4% genotipos de probable alto riesgo. Correspondiendo la mayor frecuencia a HPV-6 (21,78%), seguido por HPV11 (9,9%), HPV 31, 58 (11,88%), HPV 56, 83, 66 (8,91%), HPV 53, 62 de probable alto riesgo (7,92%), HPV 16, 18 (4.95%) y HPV 84, 61, 81 (4,95%). Un 15,8% de las muestras fueron positivas no genotipificables.

La inclusión de la técnica de HRM como método de screening permite agilizar el diagnóstico de genotipos de HPV, dado que en los casos de muestras con patrones de melting correspondientes a los genotipos 6, 11,16 y 18, se podría efectuar directamente la PCR específica sin necesidad de llevar a cabo una secuenciación.

Los resultados demuestran que los genotipos de alto riesgo HPV 16 y 18, de mayor prevalencia a nivel mundial, no son los más prevalentes en la población de Mar del Plata. Adicionalmente, otros genotipos de alto riesgo como HPV 31 y 58, como algunos genotipos de probable alto riesgo (HPV 53, 62) también están presentes en nuestra población, lo que podría constituir un rasgo epidemiológico de importancia regional y ser de utilidad en el futuro en los programas de vacunación.

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